Метод определения сроков овуляции у сук
Сегодня выходит на первый план грамотный, научно-обоснованный подход к племенному разведению собак. Высокая племенная ценность, уникальность некоторых особей является предпосылкой к тщательному обследованию репродуктивного аппарата собак не только с целью исключения инфекционных заболеваний, но и для выявления сроков овуляции. Особенно актуально такое обследование для животных, выезжающих на вязку в другие регионы страны и мира.
Многие заводчики понимают необходимость диагностики эструса, однако, дефицит информации, разрозненность данных по этому вопросу, а также недостаток специалистов в ряде случаев приводит к получению недостоверных данных или их неправильной интерпретации. Таким образом, наличие большого спроса на диагностику полового цикла у сук явилось причиной разработки алгоритма его исследования с выведением нормативных показателей и определением параметров овуляции.
Прежде всего, необходимо дать краткую характеристику полового цикла сук. Собака является моноцикличным животным, периодичность цикла составляет от 4 до 12 месяцев. Выделяют следующие стадии: проэструс, эструс, метэструс и анэструс. Начало течки, или проэтрус, проявляется соответствующими изменениями в половом аппарате: отмечается рост фолликулов и увеличение в них количества рецепторов к ФСГ. Клинически эта стадия характеризуется гиперемией слизистой влагалища, отёчностью вульвы, появлением кровянистых выделений. Под влиянием фоллитропина совместно с различными факторами роста происходит стимуляция развития примордиальных фолликулов, а также дифференцировка и пролиферация клеток гранулёзы. Из множества начинающих рост фолликулов созревают лишь единицы. Стадия эструса соответствует половой охоте и овуляции, и именно в этот период следует проводить вязку. Чёткую границу между стадиями уловить трудно, однако во время эструса наблюдается размягчение вульвы, изменение характера вагинальных выделений, готовность животного к спариванию. Затем на месте лопнувшего фолликула образуется полость, которая быстро заполняется гранулёзными клетками, наполненными жёлтым пигментом лютеином. Развитие жёлтого тела происходит в стадию метэструса, не зависимо от того произошло оплодотворение или нет. Как известно, беременность у собак имеет продолжительность 58-65 суток, и после её разрешения начинается стадия анэструса, или полового покоя.
Становится понятным, что подготовка к овуляции протекает под воздействием комплекса факторов, важнейшую роль из которых играют гормоны. Известно, что эстрогены и гестагены регулируют пролиферативные процессы в слизистой оболочке влагалища, которая состоит из многослойного плоского эпителия. В зависимости от степени зрелости, вагинальный эпителий может быть представлен парабазальными, промежуточными, поверхностно-промежуточными и поверхностными клетками. Морфологически они различаются следующим образом: парабазальные клетки самые мелкие, округлой формы, большую часть клетки занимает ядро. Промежуточные приблизительно вдвое крупнее за счёт цитоплазмы, поверхностно-промежуточные клетки истончаются, приобретают несколько угловатую форму. Поверхностные клетки самые крупные, часто безъядерные, содержащие гранулы кератогиалина В фазе анэструса вагинальный эпителий тонкий и бледный, в основном представлен парабазальными клетками. Овуляторный пик характеризуется наибольшей степенью зрелости вагинального эпителия, т.е. выявлением в вагинальном мазке более 90 % поверхностных клеток с наивысшим процентом кариопикноза (более 80%) и большой восприимчивостью к красителю. Развитие жёлтого тела приводит к появлению в мазке большого количества роговых чешуек, лейкоцитов и промежуточных клеток.
В нашем исследовании мы поставили следующие задачи:
• выявить динамику изменения эстрадиола и прогестерона в период проэструса и эструса и сопоставить её с результатами цитологического исследования вагинальных мазков• подвергнуть анализу данные о сроках вязки и оплодотворяемости в связи с эндокринным статусом и степенью зрелости вагинального эпителия с целью определения оптимальных параметров для спаривания
Исследованию подверглись 22 собаки в возрасте от 1,5 до 7 лет в различные периоды проэструса и эструса. Концентрация прогестерона и эстрадиола в сыворотке крови определялась иммуноферментным методом с использованием анализатора вертикального сканирования и специальных диагностических наборов на базе клинико-биохимической лаборатории СПбГАВМ. Взятие мазков осуществлялось стерильными ватными палочками с бокового свода влагалища, препараты фиксировались специальным красителем Май-Грюнвальда и докрашивались красителем Романовского-Гимза. В мазках высчитывалось процентное соотношение парабазальных, промежуточных, поверхностно-промежуточных и поверхностных клеток из 100 штук.
Анализируя полученные результаты, мы выявили общую закономерность изменения динамики гормонов для всех исследованных животных и выделили следующие фазы проэструса:
1. Фаза относительного покоя. Продолжается от начала пустовки в течение 5-15 суток. Не смотря на выраженные изменения состояния наружных половых органов, уровень прогестерона и эстрадиола находится на относительно низком уровне, не превышая нормативные значения соответствующие стадии анэструса Считается, что в этот период происходит стимуляция развития примордиальных фолликулов, пролиферация клеток гранулёзы под воздействием ФСГ.2. Фаза начала роста эстрадиола. В течение 2 — 3 суток после первой фазы обнаруживается некоторое повышение концентрации эстрадиола. В этот период фолликулы продолжают созревать и синтезируют достаточное количество эстрогенов, которые, в свою очередь стимулируют выброс лютенизирующего гормона. 3. Фаза начала роста прогестерона.. Под воздействием лютеотропина стероидогенез в фолликулах переключается на выработку прогестерона. В дальнейшем рост прогестерона будет продолжаться, минуя овуляцию, вплоть до стадии метэструса. Однако, выделяется ещё одна фаза:4. Фаза пика эстрадиола. Продолжительность этой фазы 1 — 3 суток. Резкий выброс эстрогенов обусловлен гибелью большого числа фолликулов, не достигших окончательной зрелости с высвобождением большого количества фолликулярной жидкости. Пиковые концентрации эстрадиола, определяемые в крови, приводят к мощному выбросу гонадолиберина гипоталамусом, а следовательно - и к секреции гонадотропных гормонов, в наибольшей степени ЛГ. Предовуляторный выброс лютеотропина способствует дальнейшему росту уровня прогестерона. Последний вместе с ФСГ и ЛГ индуцирует синтез протеолитических ферментов в яичниках, а комплекс факторов (натрийуретический пептид, ангиотензин II, пролактин, нейропептид У, вазопрессин, брадикинин) увеличивают гидростатическое давление в фолликулярной полости.
Таким образом, под воздействием вышеперечисленных причин фолликулярная стенка разрывается и происходит овуляция. По данным различных исследователей, овуляции соответствует концентрация прогестерона в пределах 35 - 55 нмоль/л. В наших исследованиях мы выявили при повышении прогестерона до 32 - 43 нмоль/л довольно резкое падение уровня эстрадиола.
Результаты исследований представлены в таблице.
ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ПРОГЕСТЕРОНА И ЭСТРАДИОЛА В СТАДИЯХ ПРОЭСТРУСА И ЭСТРУСА У СУК